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rna斑点杂交

与DNA斑点杂交类似,每个样品至多加10μg总RNA(经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化)。方法是将RNA溶于5μlDEPC水,加15μl甲醛/SSC缓冲液(10×SSC中含0.15mol/l 甲醛)使RNA变性。然后取5~8μl点样于处理好的滤膜上,烘干。

培养细胞,标本处理技术可以简化,不用提取和纯化RNA。方法是用含0.5-Nonidet P40的低渗缓冲液对多种动物细胞作简单处理,离心去掉细胞核和细胞碎片,就得到基本不带DNA而富含RNA的细胞质提取物,这一粗RNA在高盐下用甲醛变性,不需加工直接点到硝酸纤维素膜上。本法可以快速检测大量标本,而只需极少量的细胞(5×104)或组织。

整个RNA实验中,要防止激活内源性RNase,有许多种预防措施,有一种是在样品中加入核糖核苷氧矾基复合物(RVC)。

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