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基因表达检测

荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时监控反应过程。随着PCR 反应的进行,反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一次荧光强度信号,这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,结合相应的软件对产物进行分析,可以得到荧光扩增曲线,计算待测样品初始模版的量。实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃,运用该项技术,可以对DNA、RNA样品进行相对定量、绝对定量和定性分析。

1.相对定量

包括RNA提取、反转录和扩增,采用SYBR Green I法和TaqMan探针法两种方式,一般采用2- ΔΔ Ct 法进行计算。每个样本重复三次,一般情况我公司提供内参基因引物。

2.绝对定量

需要制备标准品并建立标准曲线,然后检测目的样本中的基因,比对标准曲线得到基因准确拷贝数。

细胞(≥106 )、组织(≥300mg)、血液(≥1ml)、叶片(≥100mg)等样品材料,基因组DNA或总RNA(体积≥20μl,浓度≥50 ng/μl)。

引物和探针及序列,反转录胶图,原始数据(包括扩增曲线和熔解曲线)、数据分析结果及实验报告。

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