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现代分子生物学实验原理与技术

《现代分子生物学实验原理与技术》是一部由陈德富编著的书籍,是适应21世纪生命科学发展需要的现代分子生物学实验技术教材和参考书。

全书共五篇三十章,包括分子生物学实验基本操作、DNA相关实验、RNA相关实验、基因表达及附录,介绍了广泛使用的现代分子生物学实验技术的基本原理、实验流程和注意事项。原理介绍在先,随后是详细的实验流程,最后是为巩固所学内容提出的思考题。在介绍原理和流程过程中,穿插一些实用的重点提示、试剂作用及可能出现的现象。《现代分子生物学实验原理与技术》所列流程都是作者研究室正在使用的、在教学中进行过实践的、切实可行的方法,符合国内条件。

前言

第一篇 基本操作篇

第一章 绪论

第一节 基因操作技术

第二节 实验室规则与安全

第二章 仪器操作与溶液配制

第一节 常用器皿与仪器

第二节 溶液

第三章 大肠杆菌培养与保存

第一节 培养前准备

第二节 大肠杆菌培养

第三节 大肠杆菌菌株保存

第四章 基因操作中的酶学反应

第一节 常用酶的选购与保存

第二节 限制性内切核酸酶

第三节 限制性内切核酸酶消化DNA实验

第四节 DNA作图

第五节 连接酶

第六节 其他核酸酶

第五章 电泳技术

第一节 基本原理

第二节 琼脂糖凝胶电泳

第三节 从琼脂糖凝胶中回收DNA

第四节 聚丙烯酰胺凝胶电泳

第五节 从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA

第二篇 DNA篇

第六章 DNA基本操作

第一节 DNA保存

第二节 DNA检测

第三节 DNA浓缩

第四节 DNA纯化

第七章 扩增与提取质粒DNA

第一节 质粒有关基本知识

第二节 质粒DNA提取

第三节 质粒DNA纯化

第八章 DNA转化

第一节 制备感受态细胞

第二节 转化

第九章 扩增与提取噬菌体DNA

第一节 噬菌体生活史

第二节 感染力测定

第三节 噬菌体回收与繁殖

第四节 提取噬菌体DNA

第十章 提取真核生物基因组DNA与构建基因组文库

第一节 SDS/酚法提取基因组DNA

第二节 试剂盒法提取基因组DNA

第三节 CTAB法提取基因组:DNA

第四节 构建基因组DNA文库

第十一章 PCR基本操作

第一节 PCR基本原理

第二节 引物设计

第三节 耐热DNA聚合酶

第四节 PCR仪

第五节 PCR基本操作

第六节 PCR实例

第七节 预防污染

第八节 热启动

第十二章 DNA重组

第一节 重组流程

第二节 插入DNA的准备

第三节 载体的准备

第四节 连接

第五节 插入DNA的修饰与改造

第六节 转化

第七节 重组子筛选

第十三章 探针制备

第一节 探针标记法

第二节 随机引物法

第三节 末端标记法

第四节 探针纯化

第十四章 PCR产物克隆

第一节 PCR产物重组策略

第二节 PCR产物的纯化

第三节 末端平齐

第四节 TA克隆

第五节 添加限制性内切核酸酶识别序列

第十五章 PCR应用

第一节 菌落PCR

第二节 简并引物PCR

第十六章 Southern印迹

第一节 DNA酶切

第二节 琼脂糖凝胶电泳

第三节 变性、转膜与固定

第四节 杂交

第十七章 分子标记

第一节 微卫星标记

第二节 RFLP与RAPD

第十八章 DNA序列测定与比对

第一节 测序原理

第二节 自动测序仪

第三节 DNA序列的同源比对

第三篇 RNA篇

第十九章 RNA提取

第一节 RNA实验前的准备

第二节 实验材料

第三节 用AGPC法提取RNA

第四节 用NP-40法提取RNA

第五节 使用试剂盒提取RNA

第二十章 纯化poly(A)+RNA

第一节 利用oligo(dT)纯化poly(A)+mRNA

第二节 用oligo(dT)纤维素进行柱层析

第二十一章 构建cDNA文库

第一节 以质粒为载体构建cDNA文库

第二节 以九噬菌体为载体构建cDNA文库

第二十二章 RTPCR

第二十三章 RACE

第一节 5'RACE

第二节 3'RACE

第二十四章 转录分析

第一节 Northem印迹

第二节 RNase保护分析

第四篇 表达篇

第二十五章 无细胞蛋白质合成

第一节 概述

第二节 大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统

第三节 小麦胚芽无细胞蛋白质合成系统

第二十六章 大肠杆菌表达系统

第一节 表达载体结构

第二节 表达中的问题

第三节 表达实例与SDSPAGE检测

第二十七章 枯草杆菌表达系统

第一节 菌株与载体

第二节 转化

第三节 蛋白质的提取

第二十八章 放线菌表达系统

第一节 菌株与载体

第二节 放线菌培养

第三节 转化

第四节 蛋白质的提取

第二十九章 酿酒酵母表达系统

第一节 酿酒酵母表达系统概述

第二节 外源基因在酿酒酵母表达系统中的表达

第三十章 毕赤酵母表达系统

第一节 宿主

第二节 重组

第三节 重组基因的表达

第五篇 附录

附录一 储液配制

附录二 核酸及蛋白质数据

附录三 各种识别位点的限制性内切核酸酶分类表

附录四 部分限制性内切核酸酶需要的保护碱基

附录五 筛选重组子用的平板标签贴纸(φ:9cm)

附录六 常用DNA相对分子质量标准物的琼脂糖凝胶电泳图像示意图

附录七 本书作为教材的使用方法

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